Os máis propensos a fallas e solucións de HPLC

Como instrumento de alta precisión, a HPLC pode provocar facilmente algúns pequenos problemas problemáticos se non se opera da forma correcta durante o seu uso.Un dos problemas máis comúns é o problema da compresión da columna.Como solucionar rapidamente un problema dun cromatógrafo defectuoso.O sistema HPLC consta principalmente dunha botella depósito, unha bomba, un inxector, unha columna, unha cámara de temperatura da columna, un detector e un sistema de procesamento de datos.Para todo o sistema, os piares, as bombas e os detectores son os compoñentes fundamentais e as principais localizacións propensas a problemas.

A clave da presión da columna é a área que precisa atención cando se usa HPLC.A estabilidade da presión da columna está intimamente relacionada coa forma do pico cromatográfico, a eficiencia da columna, a eficiencia de separación e o tempo de retención.A estabilidade da presión da columna non significa que o valor de presión sexa estable nun valor estable, senón que o intervalo de flutuación da presión está entre 345 kPa ou 50 PSI (permitindo o uso da elución en gradiente cando a presión da columna é estable e cambia lentamente).A presión demasiado alta ou moi baixa é un problema de presión da columna.

Os máis propensos a fallas e solucións de HPLC

1, a alta presión é o problema máis común no uso de HPLC.Isto significa un aumento repentino da presión.En xeral, hai as seguintes razóns: (1) En xeral, isto débese ao bloqueo da canle de fluxo.Neste punto, debemos examinalo por anacos.a.En primeiro lugar, corte a entrada da bomba de baleiro.Neste punto, o tubo PEEK encheuse de líquido para que o tubo PEEK fose máis pequeno que a botella de disolvente para ver se o líquido goteaba a vontade.Se o líquido non gotea ou gotea lentamente, o cabezal do filtro de disolvente está bloqueado.Tratamento: remollo en ácido nítrico ao 30% durante media hora e enxágüe con auga ultrapura.Se o líquido gotea ao azar, a cabeza do filtro de disolvente é normal e está a ser revisada;b.Abra a válvula de purga para que a fase móbil non pase pola columna e, se a presión non se reduce significativamente, a cabeza branca do filtro está bloqueada.Tratamento: os puntos brancos filtrados foron eliminados e sonicados con isopropanol ao 10% durante media hora.Asumindo que a presión cae por debaixo dos 100 PSI, a cabeza branca filtrada é normal e estase comprobando;c.Retire o extremo de saída da columna, se a presión non diminúe, a columna está bloqueada.Tratamento: se se trata dun bloqueo de sal tampón, enxágüe o 95% ata que a presión sexa normal.Se a obstrución é causada por algún material máis conservado, debería utilizarse un fluxo máis forte que a fase móbil actual para precipitarse cara á presión normal.Se a presión de limpeza a longo prazo non diminúe segundo o método anterior, pódese considerar que a entrada e saída da columna están conectadas ao instrumento, pola contra, e a columna pódese limpar coa fase móbil.Neste momento, se a presión da columna aínda non se reduce, a placa da peneira de entrada da columna só se pode substituír, pero unha vez que a operación non é boa, é fácil reducir o efecto da columna, así que intente usar menos.Para problemas difíciles, pódese considerar a substitución da columna.

(2) Configuración incorrecta do caudal: pódese restablecer o caudal correcto.

(3) Relación de fluxo incorrecta: o índice de viscosidade de diferentes proporcións de fluxos é diferente e a presión do sistema correspondente do fluxo con maior viscosidade tamén é maior.Se é posible, os disolventes de viscosidade máis baixa pódense substituír ou restablecer e preparar.

(4) Deriva cero da presión do sistema: axuste o cero do sensor de nivel de líquido.

2, a presión é demasiado baixa (1) adoita ser causada pola fuga do sistema.Que facer: Busca cada conexión, especialmente a interface nos dous extremos da columna, e aperta a zona de fugas.Retire o poste e aperta ou forra a película de PTFE coa forza adecuada.

(2) O gas entra na bomba, pero a presión adoita ser inestable neste momento, alta e baixa.Máis gravemente, a bomba non poderá absorber o fluído.Método de tratamento: abra a chave de limpeza e limpa a un caudal de 3 ~ 5 ml/min.Se non, as burbullas de aire foron aspiradas na válvula de escape mediante un tubo de agulla dedicado.

(3) Sen saída de fase móbil: comprobe se hai unha fase móbil na botella do depósito, se a pía está inmersa na fase móbil e se a bomba está funcionando.

(4) A válvula de referencia non está pechada: a válvula de referencia está pechada despois da desaceleración.Normalmente baixa a 0,1.~ 0,2 ml/min despois de pechar a válvula de referencia.

Resumo:

Neste traballo só se analizan os problemas comúns na cromatografía líquida.Por suposto, na nosa aplicación práctica, atoparemos máis outros problemas.No manexo de avarías, debemos seguir os seguintes principios: só cambiar un factor á vez para determinar a relación entre o factor hipotético e o problema;Xeralmente, ao substituír pezas para a resolución de problemas, debemos prestar atención a poñer de novo as pezas intactas desmontadas para evitar o desperdicio;Formar un bo hábito de rexistro é a clave para o éxito do tratamento de fallos.En conclusión, ao usar HPLC, é importante prestar atención ao pretratamento da mostra e ao correcto funcionamento e mantemento do equipo.